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薄層雖小，事兒不少

????????????????????????????——小談薄層檢測(cè)注意事項(xiàng)

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薄層色譜法系將供試品溶液點(diǎn)于薄層板上，在展開容器內(nèi)用展開劑展開，使供試品所含成分分離，所得色譜圖與適宜的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)按同法所得的色譜圖對(duì)比，得出鑒別結(jié)果；亦可用薄層色譜儀進(jìn)行掃描，用于鑒別、檢查或含量測(cè)定。

常規(guī)薄層色譜由于具有同板同時(shí)可以檢測(cè)多個(gè)樣品，分析時(shí)間短，固定相相對(duì)廉價(jià)，即用即棄，不用擔(dān)心樣品中雜質(zhì)的污染，檢測(cè)不受溶劑的干擾，色譜的直觀性強(qiáng)，可同板直觀觀察相互比較。但另一方面，因?yàn)樗且环N“敞開系統(tǒng)”的色譜技術(shù)，與柱色譜的區(qū)別之一是除材料及器材以外，外界環(huán)境條件對(duì)被分離物質(zhì)的色譜行為影響很大，被分離的物質(zhì)色譜行為機(jī)制也很復(fù)雜；其次是由于分析的全過程是離線多步驟操作,所以操作技巧也明顯的影響色譜質(zhì)量。因而薄層色譜,尤其是常規(guī)薄層色譜,又被視為是一種較難駕馭的技術(shù)。為了充分發(fā)揮薄層色譜技術(shù)在中藥分析方面的優(yōu)勢(shì),提高色譜的分離度和重現(xiàn)性,注意控制影響色譜質(zhì)量的因素是非常重要的。以下從薄層色譜操作過程細(xì)說注意點(diǎn)。

1.取樣

大部分供試品使用干凈的粉碎機(jī)粉碎即可；烏梅染色等需要整粒取樣；如樣品性狀差異較大，需要獨(dú)立取樣，如降香等。

2.點(diǎn)樣

除另有規(guī)定外,在潔凈干燥的環(huán)境中,用專用毛細(xì)管或配合相應(yīng)的半自動(dòng)、自動(dòng)點(diǎn)樣儀點(diǎn)樣于薄層板上。一般為圓點(diǎn)狀或窄細(xì)的條帶狀,點(diǎn)樣基線距底邊10~15mm,高效板一般基線離底邊8~10mm。圓點(diǎn)狀直徑一般不大于4mm.高效板一般不大于2mm。接觸點(diǎn)樣時(shí)注意勿損傷薄層表面。條帶狀寬度一般為5~10mm,高效板條帶寬度一般為4-8mm,可用專用半自動(dòng)或自動(dòng)點(diǎn)樣儀噴霧法點(diǎn)樣。點(diǎn)間距離可視斑點(diǎn)擴(kuò)散情況以相鄰斑點(diǎn)互不干擾為宜,一般不少于8mm,高效板供試品間隔不少于5mm。

雖然鑒別不能也不應(yīng)等同于定量測(cè)定，但在供試品溶液、對(duì)照藥材溶液、化學(xué)對(duì)照品液均定量制備，在薄層板上定量點(diǎn)樣，則樣品得到的色譜不僅可以回答“有沒有”和“是不是”（即真?zhèn)危┑膯栴}，還可以粗略地進(jìn)行量化評(píng)價(jià)，在一定程度上提供“優(yōu)劣”的信息。? 因此，點(diǎn)樣時(shí)，樣品和對(duì)照藥材要盡量按照等量來進(jìn)行。

3.展開

展開缸日常用的最多的是直立式展開箱，分為平底展開缸和雙槽展開缸。雙槽展開箱具有節(jié)省溶劑、便于預(yù)平衡、可控制展開缸內(nèi)相對(duì)濕度等優(yōu)點(diǎn)。大多數(shù)中藥樣品適宜用直立式不飽合或部分飽和（展開前使溶劑蒸氣在展開缸內(nèi)擴(kuò)散平衡一定時(shí)間）。

放置過的硅膠薄層板，在使用前需105℃活化處理并放置在干燥器內(nèi)。為了不同實(shí)驗(yàn)室之間及不同季節(jié)均可重現(xiàn)試驗(yàn)結(jié)果，應(yīng)盡可能在相對(duì)濕度及溫度可控的條件下展開，并記錄實(shí)際的相對(duì)濕度和溫度?？稍陔p槽展開缸的一側(cè)槽中加入適當(dāng)濃度的硫酸來控制濕度：

如需飽和展開，則展開缸內(nèi)壁放同樣大小的濾紙，促使缸內(nèi)盡快達(dá)到飽和狀態(tài)。

展開注意事項(xiàng)：①展開劑的配比要準(zhǔn)確、經(jīng)濟(jì)，展開劑距離原點(diǎn)5mm左右為宜；②部分品種的展開劑較特殊，如取混合溶劑的上層/下層溶液，氨蒸氣飽和等；③一般高沸點(diǎn)的、含酸堿的溶劑展開速度較慢，需要有耐心；④展開距離默認(rèn)8cm，根據(jù)具體品種可以適當(dāng)減少或增加，有必要時(shí)可以放置冰箱內(nèi)低溫展開，展開劑不可多次重復(fù)使用。

4.顯色與檢視

薄層板展開完畢后，大多需要用顯色劑使展開后的斑點(diǎn)顯色，通常使用最多的是噴霧法，噴霧法用的噴霧瓶能在一定壓力下使試劑噴成均勻的細(xì)霧狀。觀察薄層色譜用的紫外光燈裝有長(zhǎng)波（365nm）和短波段（254 nm）紫外光管兩種。前者用于觀察具有熒光的色譜，后者一般用于觀察硅膠GF254板在熒光背景下的熒光猝滅暗色斑點(diǎn)。

注意事項(xiàng)：①顯色劑配制方法、濃度等要符合藥典要求，每種顯色劑要單獨(dú)保存，避免交叉使用同一個(gè)噴霧瓶；②噴顯色劑時(shí)要均勻，避免出現(xiàn)局部區(qū)域濕透的現(xiàn)象，操作過程注意保護(hù)好自己；③薄層板加熱時(shí)間要合適，至斑點(diǎn)清晰，薄層板干凈利索。

色譜斑點(diǎn)本身有顏色者,可直接在日光下觀察可見光譜;斑點(diǎn)在紫外光激發(fā)下可發(fā)射熒光者,可直接在紫外光燈下觀察熒光色譜，檢視前注意吹干或烘干溶劑。

市售薄層預(yù)制板含羧甲基纖維素鈉，如用硫酸等顯色劑，注意加熱溫度過高或加熱時(shí)間過長(zhǎng)，容易引起板面的焦化，影響顯色效果，需要特別留意。

以上是本中心在薄層檢測(cè)中的經(jīng)驗(yàn)與注意事項(xiàng)分享，僅供同仁參考。

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